DNase I是什么？簡單來說，DNase I（DNA酶I），是核酸內切酶，專職“拆解”DNA分子。它屬于脫氧核糖核酸酶家族，主要作用是水解DNA的磷酸二酯鍵，將長鏈DNA切割成短小的寡核苷酸片段。這些片段通常帶有5′-磷酸基團，便于后續實驗或生物過程的進行。DNase I可用于一系列分子生物學應用，包括RNA提取、建庫、逆轉錄，以及RT-qPCR、體外轉錄等實驗，本篇將帶大家認識下這款酶~

DNase I的作用原理

DNase I可消化單鏈或雙鏈DNA，通常來源于牛胰腺。其原理是通過水解磷酸二酯鍵生成含?5′-磷酸基團和?3′-OH基團的單脫氧核苷酸/寡核苷酸片段。它的作用機制涉及兩個主要步驟：（1）與底物進行非特異性結合。（2）進行水解反應。

圖.DNase I作用原理圖

DNase I的活性依賴于鈣離子，并能被鎂離子或二價錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNase I可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；二價錳離子存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘性末端。

圖.DNase I在不同離子環境下對底物的切割

DNase I的發展史

傳統上，DNase I主要從牛胰腺中提取，即“牛源DNase I”。牛胰腺富含這種酶，因為它在動物消化系統中幫助分解攝入的DNA。但隨著生物技術的進步，研究人員通過基因工程在細菌（如大腸桿菌）或酵母中表達人源或牛源序列，生產出“重組DNase I”（rDNase I）。相比較牛胰腺提取的DNase I來說，重組DNase I避免了動物源風險，在純度、活性、穩定性、安全性等多方面更勝一籌。

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DNase I的主要應用

1.RNA樣品處理與qPCR體系去除DNA殘留

RNA制備過程中常常混入基因組DNA，這會影響下游轉錄組測序或實時定量PCR的準確性。DNase I是清除RNA制備體系中DNA污染的“標準工具”，通過短時孵育即可降解污染DNA，而對RNA無影響。

2.DNase I足跡分析

利用DNase I在自由DNA上隨機切割，而在蛋白質結合區域無法切割的特性，通過在電泳自顯影圖中觀察蛋白“保護區”產生的酶切缺失帶（Footprint），從而精確定位DNA—蛋白質結合位點。

3.體外轉錄去除模板DNA

體外轉錄（IVT）主要是以DNA為模板，加上對應的底物和緩沖液通過體外轉錄得到RNA。在體外轉錄實驗中，合成后的RNA可能會有DNA殘留，消除DNA殘留可以減少下游純化難度并增加產品的純度。

4.缺口平移法進行DNA標記

缺口平移法，是實驗室最常用的一種脫氧核糖核酸探針標記法。該方法是DNase I與E.coli DNA Polymerase I的聯合作用實現的。

5.細胞分散輔助

在組織消化或原代細胞制備過程中，DNase I可水解細胞破裂釋放的黏稠DNA，減少細胞團聚，提升單細胞制備效率與細胞培養成功率。

6.TUNEL檢測對照

細胞凋亡TUNEL檢測中，可使用DNase I處理細胞或組織樣本，以人為制造DNA斷裂，作為陽性對照用于方法學驗證。

金普諾安|重組DNase I

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本產品是通過重組DNA技術，在畢赤酵母（Pichia pastoris）??中高效表達的重組牛胰腺脫氧核糖核酸酶I（Recombinant Bovine DNase I，也稱重組DNA酶I（牛源））。該酶是一種核酸內切酶，能夠水解單鏈或雙鏈DNA中的磷酸二酯鍵，產生帶有5’-磷酸末端的單核苷酸或寡核苷酸混合物。與傳統的動物組織提取來源的DNase I相比，本產品具有純度極高、無動物源病原體污染、批次間穩定性好等突出優點。

產品特點

數據指標

無RNase殘留

分別將空白組、DNase l與底物RNA孵育，比較瓊脂糖凝膠電泳圖變化。結果顯示金普諾安DNase l無RNase殘留。

圖：RNase殘留檢測

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